本試劑盒采用實時熒光PCR技術，針對Cry1Ac基因的核酸序列設計特異性引物和探針，通過實時熒光PCR反應對轉基因成分進行定性檢測。本試劑盒適用于大豆、玉米、番茄、馬鈴薯、水稻、小麥等農產品及其加工產品中轉基因成分的定性PCR檢測，加工產品不包含食用油脂和調味品。

參考標準   

行業(yè)標準SNT 1202-2010

產品規(guī)格   

40次/盒

主要成分

儲存條件  

 本試劑盒保存于-20℃，有效期12個月。

檢測步驟

1.樣本處理采用均質器、攪拌機、研缽等實驗器皿對樣本進行均質處理。

2.樣本DNA提取采用商品化的植物基因組DNA提取試劑盒，按照試劑盒說明提取樣本DNA。對提取的DNA 進行濃度測定，DNA溶液的OD260/280比值在 1.7-2.0 為最佳。

3.試劑準備冰上解凍反應試劑，反應液保持避光，解凍后將反應液混勻并簡短離心，按每管22ul的量分裝至PCR管中。

4.PCR加樣每管中加入DNA樣本3ul（DNA濃度為 50ng/ul左右），蓋好管蓋，簡短離心，同時做陽性對照，陰性對照和空白對照（以水代替樣本DNA）。

5.PCR擴增將加好的樣品放置在PCR儀中，熒光通道選擇FAM， PCR反應參數見表，使用不同的PCR 儀，反應參數可適當調整

6.結果分析

基線和閾值的設置：基線范圍設置在3-15個循環(huán)，閾值設置在基線剛好超過陰性對照擴增曲線的最高點。

質量控制：陽性對照CT≤30，有S型擴增曲線；陰性對照無CT值，擴增曲線為直線；空白對照無CT值，擴增曲線為直線。若出現任一結果不正常，需重做實驗。

結果判定

1.檢測樣品無CT值，曲線為直線或無S型擴增曲線，判定結果為陰性。

2.檢測樣品CT≤36，出現S型擴增曲線，判定結果為陽性。

3.檢測樣品36﹤CT﹤40并有S型擴增曲線，需適當增加DNA模板量后重新做實時熒光PCR檢測，再次檢測結果CT值仍處于36和40之間，并且有S 型擴增曲線，判定結果為陽性，否則判定為陰性。

最低檢測限    

0.1%

注意事項

1.初次使用前請仔細閱讀說明書，并嚴格按照說明書進行操作。

2.實驗操作要嚴格分區(qū)，防止污染。

3.建議先用實時熒光PCR法檢測內源基因來判定樣本提取的DNA是否滿足 PCR檢測要求。

4.反應液反復凍融會降低靈敏度，建議分管保存。

5.本試劑盒僅供定性篩查用。