沙門氏菌（Salmonella）是最常見的食源性細(xì)菌病原體，沙門氏菌主要污染肉類食品，家禽、蛋類、乳類及其制品也可受沙門氏菌污染。本公司自主研制的沙門氏菌活菌熒光PCR檢測試劑盒能快速檢測出此類食品中存在的沙門氏菌菌屬，且相比DNA-PCR的檢測方法，本檢測方法可以區(qū)分死菌和活菌，因此不需要進(jìn)行再次驗(yàn)證。 本試劑盒采用實(shí)時(shí)熒光RT-PCR技術(shù)，針對(duì)沙門氏菌基因的核酸序列設(shè)計(jì)特異性引物和探針，通過實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)對(duì)食品中的沙門氏菌進(jìn)行定性檢測，適用于牛奶、果汁、肉制品中沙門氏菌的定性檢測。

產(chǎn)品規(guī)格 

40次/盒

主要成分 

保存條件 

 本試劑盒保存于-20℃，有效期12 個(gè)月。

檢測步驟     

1.樣本處理取25ml(g)樣品，加入225ml的培養(yǎng)基，均質(zhì)后于 37度增菌培養(yǎng)約15h。

2.樣本RNA提取取1ml增菌液，采用商品化的細(xì)菌RNA提取試劑盒，按照試劑盒說明提取樣本 RNA。采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA 待用。

3.試劑準(zhǔn)備冰上解凍反應(yīng)試劑，反應(yīng)液保持避光，解凍后將反應(yīng)液混勻并簡短離心，按每管15ul的量分裝至PCR管中。

4.PCR加樣每管中加入cDNA樣本10ul，蓋好管蓋，簡短離心，同時(shí)做陽性對(duì)照，陰性對(duì)照和空白對(duì)照（以水代替樣本 cDNA）。

5.PCR擴(kuò)增將加好的樣品放置在PCR儀中，熒光通道選擇FAM， PCR反應(yīng)參數(shù)見表，使用不同的PCR儀，反應(yīng)參數(shù)可適當(dāng)調(diào)整。

6.結(jié)果分析

基線和閾值的設(shè)置：基線范圍設(shè)置在3-15個(gè)循環(huán)，閾值設(shè)置在基線剛好超過陰性對(duì)照擴(kuò)增曲線的最高點(diǎn)。

質(zhì)量控制：陽性對(duì)照CT≤30，有S 型擴(kuò)增曲線；陰性對(duì)照無CT值，擴(kuò)增曲線為直線；空白對(duì)照無CT值，擴(kuò)增曲線為直線。若出現(xiàn)任一結(jié)果不正常，需重做實(shí)驗(yàn)。

結(jié)果判定      

1.檢測樣品無CT值，曲線為直線或無S 型擴(kuò)增曲線，判定結(jié)果為陰性。

2.檢測樣品CT≤35，出現(xiàn)S型擴(kuò)增曲線，判定結(jié)果為陽性。

3.檢測樣品35﹤CT﹤40并有S型擴(kuò)增曲線，需適當(dāng)增加DNA模板量后重新做實(shí)時(shí)熒光PCR檢測，再次檢測結(jié)果CT值仍處于35和40之間，并且有S型擴(kuò)增曲線，判定結(jié)果為陽性，否則判定為陰性。

最低檢測限 

6cfu/25g(ml)

注意事項(xiàng)

1.初次使用前請仔細(xì)閱讀說明書，并嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。

2.實(shí)驗(yàn)操作要嚴(yán)格分區(qū)，防止污染。

3.RNA提取時(shí)要使用無RNA酶的槍頭和管子，防止RNA 降解。

4.反應(yīng)液反復(fù)凍融會(huì)降低靈敏度，建議分管保存。

5.本試劑盒僅供定性篩查用。