志賀氏菌（Shigelia）引起的細菌性痢疾常發(fā)現于人員大量集中的地方，如餐廳和食堂。與其相關的食品包括色拉、生蔬菜、奶和奶制品、肉禽、水果和面包制品等。本公司自主研發(fā)的志賀氏菌活菌檢測試劑盒能快速特異地檢測出此類食品中含有的志賀氏菌，且相比DNA-PCR的檢測方法，本檢測方法可以區(qū)分死菌和活菌，因此不需要進行再次驗證。本試劑盒采用實時熒光RT-PCR反應對食品中的志賀氏菌進行檢測，靈敏度高，特異性強，適用于乳制品、肉制品中志賀氏菌的定性檢測。

產品規(guī)格

40次/盒

主要成分

儲存條件

本試劑盒保存于-20℃，有效期12個月。

檢測步驟

1.樣本處理取25ml(g)樣品，加入 225ml的培養(yǎng)基，均質后于 37 度增菌培養(yǎng)約 6h。

2.樣本RNA 提取取1ml增菌液，采用商品化的細菌 RNA提取試劑盒，按照試劑盒說明提取樣本 RNA 。采用反轉錄試劑盒將 RNA反轉錄成cDNA 待用。

3.試劑準備冰上解凍反應試劑，反應液保持避光，解凍后將反應液混勻并簡短離心，按每管15ul的量分裝至 PCR管中。

4.PCR加樣每管中加入cDNA樣本 10ul，蓋好管蓋，簡短離心，同時做陽性對照，陰性對照和空白對照（以水代替樣本 cDNA ）。

5.PCR擴增將加好的樣品放置在PCR儀中， 熒光通道選擇FAM， PCR 反應參數見表，使用不同的PCR儀，反應參數可適當調整。

6.結果分析

基線和閾值的設置：基線范圍設置在3-15個循環(huán)，閾值設置在基線剛好超過陰性對照擴增曲線的最高點。

質量控制：陽性對照CT≤30，有S 型擴增曲線；陰性對照無CT值，擴增曲線為直線；空白對照無CT值，擴增曲線為直線。若出現任一結果不正常，需重做實驗。

結果判定

1.檢測樣品無CT值，曲線為直線或無S 型擴增曲線，判定結果為陰性。

2.檢測樣品CT≤35，出現S型擴增曲線，判定結果為陽性。

3.檢測樣品35﹤CT﹤40并有S型擴增曲線，需適當增加DNA模板量后重新做實時熒光PCR檢測，再次檢測結果CT值仍處于35和40之間，并且有S型擴增曲線，判定結果為陽性，否則判定為陰性。

最低檢測限

5cfu/25g(ml)

注意事項

1.初次使用前請仔細閱讀說明書，并嚴格按照說明書進行操作。

2.實驗操作要嚴格分區(qū)，防止污染。

3.RNA提取時要使用無RNA酶的槍頭和管子，防止RNA降解。

4.反應液反復凍融會降低靈敏度，建議分管保存。

5.本試劑盒僅供定性篩查用。